Core Concepts
새로운 유전자 암호화 PAC1 수용체 활성화 센서 PAClight1P78A를 개발하여 다양한 생물종에서 PACAP 리간드 결합 및 확산을 감지할 수 있는 강력한 도구를 제공한다.
Abstract
이 연구에서는 인간 PAC1 수용체(hmPAC1R)를 기반으로 한 새로운 유전자 암호화 센서 PAClight1P78A를 개발하였다. PAClight1P78A는 매우 높은 동적 범위(ΔF/F0 = 1100%), 우수한 리간드 선택성, 빠른 활성화 동역학(τON = 1.15초)을 보였다.
in vitro 실험에서 PAClight1P78A는 HEK293T 세포와 원발성 신경세포에서 PACAP1-38에 의해 강력하게 활성화되었다. 또한 PAClight1P78A는 PACAP 유사체에 의해서도 활성화되었지만 VIP에는 반응하지 않았다.
안정세포주를 이용한 실험에서 PAClight1P78A와 PAClight1은 PACAP1-38에 대해 각각 29.91 nM과 22.97 nM의 높은 친화도를 보였다. 반면 PAClight1P78A는 VIP에 반응하지 않았다.
마우스 뇌 슬라이스 실험에서 PAClight1P78A는 300 nM 이상의 PACAP1-38 농도에 반응하였지만, 대조군 PAClight1P78A-ctrl은 반응하지 않았다. 또한 PAClight1P78A는 PACAP1-38에만 선택적으로 반응하고 VIP, CRF, ENK 등 다른 신경펩타이드에는 반응하지 않았다.
in vivo 실험에서 PAClight1P78A를 발현한 마우스에 PACAP1-38을 주입하면 126% ΔF/F0의 형광 증가가 관찰되었지만, PAClight1P78A-ctrl을 발현한 마우스에서는 16% 증가에 그쳤다.
제브라피시 실험에서도 PAClight1P78A는 PACAP1-38 주입 후 145.76% ΔF/F0의 강력한 형광 증가를 보였다.
종합하면, PAClight1P78A는 PACAP 리간드 결합 및 확산을 감지할 수 있는 강력한 도구로, 기초 연구와 신약 개발 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
Stats
PAClight1P78A는 HEK293T 세포에서 PACAP1-38에 의해 1109% ΔF/F0의 형광 반응을 보였다.
PAClight1P78A는 원발성 신경세포에서 PACAP1-38에 의해 729% ΔF/F0의 형광 반응을 보였다.
PAClight1P78A는 300 nM 이상의 PACAP1-38 농도에 반응하였지만, PAClight1P78A-ctrl은 반응하지 않았다.
PAClight1P78A를 발현한 마우스에 PACAP1-38을 주입하면 126% ΔF/F0의 형광 증가가 관찰되었지만, PAClight1P78A-ctrl을 발현한 마우스에서는 16% 증가에 그쳤다.
제브라피시 실험에서 PAClight1P78A는 PACAP1-38 주입 후 145.76% ΔF/F0의 강력한 형광 증가를 보였다.
Quotes
"새로운 GPCR 기반 센서는 기초 연구와 신약 개발 분야에서 다양하게 활용될 수 있다."
"PAClight1P78A는 PACAP 리간드 결합 및 확산을 감지할 수 있는 강력한 도구이다."